Batteri proteolitici 
Batteri nitrificanti
diluizioni del campione preparazione del terreno per i proteolitici
RICERCA DEI BATTERI PROTEOLITICI E NITROSANTI
L'azoto organico è presente nel suolo prevalentemente sotto forma di proteine e si rende disponibile come sostanza nutritizia per le piante grazie all'attività proteolitica di microrganismi " proteolitici", batteri, funghi e attinomiceti ,capaci di elaborare enzimi chiamati proteinasi che convertono le proteine in unità più piccole, i peptidi. A loro volta i peptidi vengono attaccati da peptidasi e trasformati nei singoli amminoacidi. Alcune specie batteriche come Clostridium histolyticum e Clostridium sporogenes presentano elevata attività proteolitica.
Proteine proteinasi peptidi peptidasi amminoacidi
Successivamente gli amminoacidi sono sottoposti a deamminazione con liberazione del gruppo amminico NH2 come NH3.
CH 2 NH 2 COOH + 3/2 O 2 2 CO2 + H 2 O + NH3 reazione di ammonizzazione
I batteri nitrosanti come Nitrosococcus, Nitrosomonas,Nitrosovibrio sono in grado di trasformare l'ammoniaca in nitriti per ossidazione mentre i batteri nitrificanti come Nitrobacter, Nitrococcus,Nitrospina sono in grado di ossidare i nitriti a nitrati
NH3 + 3/2 O2 HNO2 +H 2°
2NO2- + O2 ® 2NO3-
Operazioni preliminari per la ricerca dei batteri proteolitici:
Diluizioni del campione di terra con acqua distillata sterile con fattore dieci
Principio del metodo: la presenza dei batteri proteolitici nel campione di suolo in esame può essere evidenziata dalla capacità di fluidificare la gelatina
Materiale :
24 provettine da sierologia con tappi
Pipette sterili da 1 ml e da 2 ml
Termostato a 28°C
Sospensioni diluizioni del campione di terra
Terreno di coltura preparato come segue :
soluzione salina di Winogradsky 50 ml, Gelatina 30 g,Acqua di pozzo sterile o soluzione di oligoelementi 1 ml , Acqua distillata 950 ml
Procedimento: preparare 24 provette contenenti 2mI di terreno per la prova della proteoiísi .Seminare 8 serie di 3 provette con aliquote di 0,5 ml delle sospensioni –diluizione del campione da 10 -1 a 10 -8 . Incubare a 28'C. La lettura si effettua dopo 1,2,3,4,5,7,9,12 e 15gg, dopo aver posto le provette in frigorifero per 1 - 2h considerando positive le provette in cui la gelatina resta liquida. Dopo aver annotato per ogni lettura i tubi positivi e le rispettive diluizioni, si determina il numero di germi proteoltici riferiti ad 1 g di terra utilizzando la formula risolutiva di Thomas.
Risultati: numeri di tubi positivi: 20 su 24
formula: numeri di tubi positivi/radice (volume numero tubi negativi x volume numero tutti i tubi) x 100
valore medio: 4 x 100RICERCA DEI BATTERI NITROSANTI E NITRIFICANTI
Principio del metodo
La ricerca della presenza dei batteri nitrosanti , batteri Gram + in grado di ossidare l'ammoniaca a nitriti si effettua mediante la semina di aliquote di 0,5 ml delle sospensioni-diluizioni del campione in un terreno liquido selettivo a base di solfato di ammonio. Dopo incubazione la presenza dei nitriti viene rilevata da una colorazione blu che si manifesta in seguito all'aggiunta del reattivo difenilammina sulfurica.
Materiale:
pipette da 1 ml sterili;
terreno di coltura:
soluzione di Winogradsky 50 ml ,solfato di ammonio 0,5 g ,carbonato di calcio 1 g , acqua distillata 950 ml
Procedimento Si preparano 6 serie da tre di provette contenenti 1 mI di terreno per la ricerca dei batteri nitrosanti . Si seminano aliquote di 0,5 ml delle sospensioni-diluizioni del campione( da 10 -1 a 10 -6 ) in ciascuno dei 18 tubi che vanno incubati a 28 °C per 20 giorni ; al termine dell'incubazione si rovescia ogni tubo in modo che rimanga 1 ml di coltura e si aggiungono 10 gocce di acido solforico + 10 gocce di reattivo alla difenilammina. Si considerano positivi i tubi che presentano il colore blu e si determina il numero dei batteri nitrosanti usando la formula di Thomas.
Risultati: numero di tubi positivi 17 su 18
valore medio: 8 x 100
La ricerca dei batteri nitrificanti segue la stessa procedura preparando come terreno di coltura un terreno costituito da : soluzione di Winogradsky( 50 ml) , nitrito di sodio ( 1 g),carbonato di calcio ( 1 g), acqua distillata ( 950 ml)
che va distribuito in 6 serie di tre provette, in ciascuna delle quali si seminano 0,5 ml delle sospensioni diluizioni del campione da 10 -1 a 10 -6; dopo 20 giorni di incubazione a 28 °C si rovescia il contenuto di ogni tubo e si aggiungono 0,05 g di urea, per eliminare i nitriti rimanenti,10 gocce di acido solforico,10 gocce di reattivo alla difenilammina. La presenza dei nitrati viene svelata dalla presenza del colore blue.Il calcolo sfrutta la formula di Thomas
Risultati : numero di tubi positivi 16 su 18
valore medio : 6 x 100
Gli alunni della III A O.C.B.
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