Carica microbica totale

PREPARAZIONE DELLE SOSPENSIONI – DILUIZIONI DEL CAMPIONE DI TERRA PER LA SEMINA IN TERRENO COLTURALE

La carica microbica rappresenta il numero di microrganismi presenti nel suolo e poiché essa è normalmente elevata è necessario allestire diluizioni seriali decimali ( 1:10) che consentano di avere un numero di colonie contabili nel terreno di coltura
Procedimento:
• Setacciare e rendere fine, con pestaggio in un mortaio sterile, la terra in esame
• pesare 2g e diluirli in un pallone da 1l di acqua distillata sterile e agitare vigorosamente
• prelevare 1 ml di sospensione e trasferirli in un secondo pallone da 1l di acqua distillata sterile e agitare vigorosamente
• prelevare 1 ml dal 2° pallone e trasferirli in una provetta contenente 9 ml dì acqua sterile, agitare e trasferire 1 ml in una seconda provetta contenente 9 ml di acqua sterile
• agitare e trasferire 1 ml in una terza provetta con 9 ml di acqua sterile.

Numerazione indiretta su mezzo solido C.M.T.

Principio del metodo: il principio si basa sulla semina in superficie di piastre contenenti un mezzo agarizzato di una quantità nota di sospensioni di terra (diluizioni) e sul conteggio del numero di colonie che compaiono dopo incubazione.
Il terreno utilizzato è l'estratto di terra addizionato al 2% di agar .

Materiale:
• Estratto di terra
• Agar in polvere
• Vetreria per la preparazione del terreno
• Piastre sterili
• Autoclave
• Pipette di vetro sterili da 1 ml
• Bacchetta di vetro ad L o spatola di vetro
• Provettoni contenenti la diluizione del campione di terra in esame

Procedimento : Distrìbuire l'inoculo uniformemente con una spatola di vetro a L sterile, usando tre piastre per ogni diluizione ( da 10 -6 a 10 -8 ) . Effettuata la semina incubare a 20 - 30 'C. La lettura sì effettua dopo 7gg prendendo in considerazione le piastre in cui si è sviluppato un numero di colonie compreso tra 10 e 50. Il risultato terrà conto della media delle colonie contate sulle tre piastre e del fattore di diluizione.

Risultati:
E' stata presa in considerazione la seconda serie di piastre ( diluizione 1: 5 x 10 -7 ) in quanto nella prima serie ( diluizione 1:5 x 10 -6 ) il numero delle colonie presenti è risultato superiore a 100 e nella terza serie ( diluizione 1: 5 x 10 -8) inferiore a 10
La prima delle tre piastre della diluizione 1:5 x 10 -7 ha dato un risultato superiore a 100 ed è stata pertanto scartata , la seconda piastra ha evidenziato la presenza di 50 colonie mentre la terza di 25 colonie
Carica batterica : (50 + 25) / 2 x 5 x 10 7

CARICA MICROBICA TOTALE : 187 5 milioni / grammo di suolo